Fig 1: Matriz de correlación entre las proteínas de la vía Akt y los parámetros analíticos de daño y función hepática. (A) Se muestran todas las posibles correlaciones entre las variables estudiadas. El rectángulo negro señala las correlaciones de interés: las correlaciones más relevantes entre FoxO1 y las transaminasas están indicadas con un recuadro rojo. La escala de color indica si la correlación es positiva (en azul) o negativa (en rojo). La intensidad del color y el tamaño de las elipses son proporcionales a los coeficientes de correlación (Pearson). (B) El diagrama de dispersión indica que existe una correlación positiva entre los niveles de proteína FoxO1 en tejido hepático y la concentración de transaminasas (ASAT y ALAT) en suero. Estas correlaciones fueron estadísticamente significativas, con los siguientes coeficientes de Pearson: r=0,51 para ASAT y r=0,49 para ALAT. También se representa la línea de regresión correspondiente; el área sombreada indica los intervalos de confianza al 95 %.
Fig 2: Expresión de las proteínas FoxO1 y p-Akt en el hígado de los pacientes cirróticos. Diagrama de cajas comparando los niveles de FoxO1 (A) y p-Akt (B), expresados en unidades densiométricas relativas (UDR). La UDR se calculó como la proporción entre las bandas específicas de FoxO1/tubulina y p-Akt/Akt, cuantificadas con el programa ImageJ. En la parte superior de cada figura se muestra una imagen representativa de los análisis mediante Western blot. Se observaron diferencias estadísticamente significativas (**p<0,01) al comparar la mediana de las dos proteínas de los dos grupos: FoxO1: mediana=4.4 (no cirróticos) frente a 9.5 (cirróticos), p-Akt: mediana=1.0 (no cirróticos) frente a 2.1 (cirróticos). Las cajas de la parte derecha de los paneles A y B muestran la capacidad cuantitativa de los Western blots demostrando la linealidad entre las unidades densiométricas medidas y las concentraciones elevadas de proteínas recombinantes para tubilina y Akt1 total, que se seleccionaron como controles de carga. Las líneas de regresión obtenidas a partir de las proteínas recombinantes mostraron un R2 aceptable.
Fig 3: Expression of FoxO1 and p-Akt proteins in the livers of cirrhotic patients. Box plot comparing FoxO1 (A) and p-Akt (B) levels expressed as densitometric relative units (DRU). The DRU was calculated as the ratio between the specific FoxO1/tubulin and p-Akt/Akt bands quantified with ImageJ software. A representative image of Western blot analyses is shown at the top of each figure. Statistically significant differences (**p<0.01) were observed when comparing the median of both proteins between groups: FoxO1: median=4.4 (non-cirrhotic) vs. 9.5 (cirrhotic), p-Akt: median=1.0 (non-cirrhotic) vs. 2.1 (cirrhotic). The boxes on the right side of panels (A) and (B) show the quantitative capacity of the Western blots by demonstrating the linearity between the densitometric units measured and the increasing concentrations of recombinant proteins for tubulin and total Akt1, which were chosen as loading controls. The regression lines obtained from the recombinant proteins showed an acceptable R2.
Fig 4: Correlation matrix between target proteins involved in the Akt pathway and analytical parameters of liver injury and function. (A) All possible correlations between the variables studied are shown. The black rectangle highlights the correlations of interest: the most relevant correlations between FoxO1 and transaminases are inside the red box. The color scale indicates whether it is a positive (blue) or negative (red) correlation. Color intensity and the size of the ellipses are proportional to the correlation coefficients (Pearson). (B) The scatter dot plot indicates that there is a positive correlation between the levels of FoxO1 protein in liver tissue and the concentration of transaminases (ASAT and ALAT) in serum. These correlations were statistically significant, with Pearson’s correlation coefficients: r=0.51 for ASAT and r=0.49 for ALAT. The corresponding regression line is also represented; the shaded area indicates the 95 % confidence intervals.
Fig 5: AKT1 Enhances Notch1 Nuclear Translocation via Phosphorylation. A: Co-IP confirms the interaction between Notch1 and AKT1. B: In vitro kinase assays reveal AKT1-induced Notch1 phosphorylation. C: A stable MGC803 cell line overexpressing AKT1 is treated ± LY294002; Western Blot assesses Flag-tagged AKT1 levels and IP measures Notch1’s RXX(S*/T*) motif phosphorylation. D: Statistical analysis of phospho-Akt substrate expression in Notch1 from C. E-H: After AKT1 overexpression and LY294002 treatment, subcellular fractionation is performed, and Western Blot analyzes Notch1 and Notch1-IC levels, with subsequent statistical analysis. I: Phosphoprotemic analysis identifies the phosphorylation site on Notch1. J: Immunofluorescence tests AKT1’s effect on Notch1 nuclear localization (×200). K: The quantification of Notch signal intensity in the nucleus. n = 3. Significance: vs. NC group, #P < 0.05, ##P < 0.01, ###P < 0.001; vs. oe-Myr-AKT1 group, *P < 0.05, ***P < 0.001
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